RNA樣品的的抽提

樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鍾使其*溶解。

②兩(liang) 相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯方，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體(ti) 15秒後，15到30℃孵育2到3分鍾。4℃下12000rpm離心15分鍾。離心後混合液體(ti) 將分為(wei) 下層的紅色酚氯相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配於(yu) 水相中。水相上層的體(ti) 積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉澱 將水相上層轉移到一幹淨無RNA酶的離心管中。加等體(ti) 積異丙醇混合以沉澱其中的RNA，混勻後15到30℃孵育10分鍾後，於(yu) 4℃下12000rpm 離心10分鍾。此時離心前不可見的RNA沉澱將在管底部和側(ce) 壁上形成膠狀沉澱塊。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配製），清洗RNA沉澱。混勻後，4℃下7000rpm離心5分鍾。

⑤RNA幹燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉澱在室溫空氣中幹燥5-10分鍾。

⑥溶解RNA沉澱 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反複吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存於(yu) -80℃待用。