定量PCR儀發過物質

實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為(wei) 兩(liang) 種：熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下：

　　1.TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個(ge) 特異性的熒光探針，該探針為(wei) 一寡核苷酸，兩(liang) 端分別標記一個(ge) 報告熒光基團和一個(ge) 淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從(cong) 而熒光監測係統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個(ge) 熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與(yu) PCR產(chan) 物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為(wei) 基因診斷和個(ge) 體(ti) 化用藥分析的技術平台。

　　2.SYBR熒光染料：在PCR反應體(ti) 係中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈後，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(hui) 發射任何熒光信號，從(cong) 而保證熒光信號的增加與(yu) PCR產(chan) 物的增加*同步。SYBR僅(jin) 與(yu) 雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。

　　3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個(ge) 8個(ge) 堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針，兩(liang) 端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與(yu) 淬滅基團緊緊靠近，不會(hui) 產(chan) 生熒光。PCR產(chan) 物生成後，退火過程中，分子信標中間部分與(yu) 特定DNA序列配對，熒光基因與(yu) 淬滅基因分離產(chan) 生熒光。