熒光定量PCR儀(yi) 可標記有熒光素的探針與(yu) 模板DNA混合後,完成高溫變性,低溫複性,適溫延伸的熱循環,並遵守聚合酶鏈反應規律,與(yu) 模板DNA互補配對的探針被切斷,熒光素遊離於(yu) 反應體(ti) 係中,在特定光激發下發出熒光,隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通過實時檢測與(yu) 之對應的隨擴增而變化熒光信號強度,求得CT值,同時利用數個(ge) 已知模板濃度的標準品作對照,即可得出待測標本目的基因的拷貝數。

熒光定量PCR儀的PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控製,要求越短越好,當PCR儀的降溫過程超過60s,就應該檢查儀器的製冷係統,對風冷製冷的熒光定量PCR儀要較*地清理反應底座的灰塵;對其他製冷係統應檢查相關的製冷部件。
PCR儀清洗:
1.樣品池的清洗
先打開蓋子,後用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min,然後清洗被汙染的孔;用微量移液器吸取液體,用棉簽吸幹剩餘液體;打開熒光定量PCR儀,設定保持溫度為50℃的PCR程序並使之運行,讓殘餘液體揮發去除。一般5~10min即可。
2.熱蓋的清洗
對於熒光定量PCR儀當有熒光汙染出現,而且這一汙染並非來自樣品池時;或當有汙染或殘跡物影響到熱蓋的鬆緊時,需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底麵,確保樣品池的孔鏡幹淨,無汙物阻擋光路。
3.熒光定量PCR儀外表麵的清洗
清洗儀器的外表麵可以除去灰塵和油脂,但達不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表麵進行清洗。