(1)、液相色譜分析的流程:由泵將儲(chu) 液瓶中的溶劑吸入色譜係統,然後輸出,經流量與(yu) 壓力測量之後,導入進樣器。被測物由進樣器注入,並隨流動相通過色譜柱,在柱上進行分離後進入檢測器,檢測信號由數據處理設備采集與(yu) 處理,並記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到複雜的混合物分離(極性範圍比較寬)還可用梯度控製器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似,不同的是氣相色譜改變溫度,而HPLC改變的是流動相極性,使樣品各組分在佳條件下得以分離。
(2)、液相色譜的分離過程:同其他色譜過程一樣,HPLC也是溶質在固定相和流動相之間進行的一種連續多次交換過程。它借溶質在兩(liang) 相間分配係數、親(qin) 和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質得以分離。
開始樣品加在柱頭上,假設樣品中含有3個(ge) 組分,A、B和C,隨流動相一起進入色譜柱,開始在固定相和流動相之間進行分配。分配係數小的組分A不易被固定相阻留,較早地流出色譜柱。分配係數大的組分C在固定相上滯留時間長,較晚流出色譜柱。組分B的分配係數介於(yu) A,C之間,第二個(ge) 流出色譜柱。若一個(ge) 含有多個(ge) 組分的混合物進入係統,則混合物中各組分按其在兩(liang) 相間分配係數的不同先後流出色譜柱,達到分離之目的。
不同組分在色譜過程中的分離情況,首先取決(jue) 於(yu) 各組分在兩(liang) 相間的分配係數、吸附能力、親(qin) 和力等是否有差異,這是熱力學平衡問題,也是分離的首要條件。其次,當不同組分在色譜柱中運動時,譜帶隨柱長展寬,分離情況與(yu) 兩(liang) 相之間的擴散係數、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動相的流速等有關(guan) 。所以分離終效果則是熱力學與(yu) 動力學兩(liang) 方麵的綜合效益。
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