酶標儀(yi) 和分光光度計都是實驗室常用的分析測量工具,它們(men) 的測定原理是相同的,都是使用朗伯-比耳定律,測定的都是樣本的吸光度。
一、酶標儀(yi) 和分光光度計的三大差別
酶標儀(yi) 即酶聯免疫檢測儀(yi) 。是酶聯免疫吸附試驗的儀(yi) 器又稱微孔板檢測器。可簡單地分為(wei) 半自動和全自動2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(ge) 比色計,即用比色法來進行分析。測定一般要求測試液的最終體(ti) 積在250μL以下,用一般光電比色計無法完成測試,因此對酶標儀(yi) 中的光電比色計有特殊要求。
分光光度計,又稱光譜,是將成分複雜的光分解為(wei) 光譜線的科學儀(yi) 器。測量範圍一般包括波長範圍為(wei) 380~780nm的可見光區和波長範圍為(wei) 200~380nm的紫外光區。不同的光源都有其*的發射光譜,因此可采用不同的發光體(ti) 作為(wei) 儀(yi) 器的光源。
同為(wei) ,實驗室內(nei) 測定吸光度的儀(yi) 器,酶標儀(yi) 和分光光度計存在一些不同之處,具體(ti) 差別體(ti) 現在以下三個(ge) 方麵:
(1)盛裝待測溶液的容器:
分光光度計用的是比色皿,酶標儀(yi) 使用的是塑料微孔板(酶標板)。比色皿隻能起到盛裝溶液的作用,每個(ge) 比色皿一次隻能盛裝一種溶液。酶標板常用透明的聚乙烯材料製成,對抗原抗體(ti) 有較強的吸附作用,因此用它作為(wei) 固相載體(ti) ,酶標板通常為(wei) 48孔或96孔,每個(ge) 微孔可以盛裝不同的溶液。
(2)光路的方向:
分光光度計是水平光路,而酶標儀(yi) 則是垂直光路。由於(yu) 酶標板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線隻能垂直穿過,因此酶標儀(yi) 的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從(cong) 上到下,也可以是從(cong) 下到上穿過比色液。垂直光的特點是標本吸光度受液體(ti) 濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測樣本液麵是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
(3)光路的長度:
由於(yu) 光密度(OD值)與(yu) 吸光係數,待測組分的濃度以及光路長度成正比關(guan) 係。
分光光度計采用的比色杯的寬度通常是1cm,所以光路長度固定為(wei) 1cm。因此不同儀(yi) 器,不同批次測量的數據具有同樣的可比性。
而酶標儀(yi) 采用的是垂直光路,所以光路的長度應該是液體(ti) 液麵的高度。所以測得的值受到樣品的體(ti) 積的影響。