神經幹細胞利用微重力三維細胞培養係統培養方案

1. 前期準備

- 實驗材料：獲取神經幹細胞（如從(cong) 胚胎腦組織分離）、微重力模擬裝置、神經幹細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基（含 B27 添加劑、EGF、bFGF 的 DMEM/F12 培養(yang) 基）、多聚賴氨酸包被的培養(yang) 容器、無菌器械等。

- 設備準備：與(yu) 腫瘤細胞培養(yang) 類似，調試賽奧維度CellSpace-3D微重力三維細胞培養(yang) 係統，確保溫度、氣體(ti) 環境適宜。

2. 細胞分離與(yu) 接種

- 細胞分離：解剖獲取胚胎腦組織，在無菌條件下剪碎，用胰蛋白酶消化後，通過機械吹打製成單細胞懸液，過濾去除組織塊，離心收集細胞。

- 接種：將神經幹細胞以 2 - 3×10⁵ 個(ge) /mL 的密度接種到微重力培養(yang) 裝置中，因神經幹細胞易貼壁，包被多聚賴氨酸可促進貼壁。

3. 培養(yang) 過程

- 每 2 - 3 天添加適量新鮮培養(yang) 基，維持營養(yang) 成分。觀察細胞神經球形成情況，神經球直徑達到一定大小時，可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

- 采用免疫熒光技術檢測神經幹細胞標誌物（如 Nestin）的表達，以鑒定細胞特性。

4. 誘導分化：培養(yang) 一定時間後，可更換為(wei) 含血清的分化培養(yang) 基，在微重力環境下誘導神經幹細胞向神經元、星形膠質細胞等分化，通過免疫細胞化學檢測相應細胞標誌物（如 β - Tubulin III 用於(yu) 神經元，GFAP 用於(yu) 星形膠質細胞）評估分化效果。