ND2000超微量分光光度計是一種專(zhuan) 為(wei) 微量樣本設計的分光光度計,可檢測低至1-2μL的核酸、蛋白質等生物分子的濃度和純度。其核心原理基於(yu) 朗伯-比爾定律(A=εcl),通過測量特定波長(如DNA 260 nm、蛋白質280 nm)的光吸收值,計算樣本濃度。其主要由光源、單色器、樣品室、檢測器和數據處理係統組成。光源通常采用氘燈,它能發出連續的紫外光譜。單色器(如光柵或棱鏡)用於(yu) 從(cong) 光源發出的廣譜光線中選擇出單一波長的光。樣品室內(nei) 放置了微量樣品池,其路徑長度通常在幾毫米到幾厘米之間,以適應微量樣品的測量需求。檢測器則負責捕捉經過樣品吸收後的光線強度,最後由數據處理係統進行分析和計算。
ND2000超微量分光光度計的操作指南通常包括以下步驟:
1、儀(yi) 器準備
接通電源與(yu) 預熱:將超微量分光光度計的電源線插好,打開電源開關(guan) ,等待儀(yi) 器軟件初始化。不同型號的儀(yi) 器預熱時間可能有所不同,一般需要預熱15分鍾至30分鍾,使其溫度穩定,確保儀(yi) 器處於(yu) 最佳工作狀態。
清潔樣品池:檢查樣品池是否幹淨,如有汙染或殘留液體(ti) ,需用適當的溶劑(如70%乙醇)輕輕擦拭幹淨,並用無塵紙擦幹。注意避免刮傷(shang) 樣品池表麵。
儀(yi) 器校準:使用已知濃度的標準物質進行儀(yi) 器校準,校準操作根據儀(yi) 器型號可能有所差異,請參考儀(yi) 器說明書(shu) 。這一步是為(wei) 了確保測量結果的準確性和可靠性。
2、設置測量參數
選擇測量波長:根據待測物質的特性和實驗要求,選擇合適的測量波長。不同的物質在特定波長下有最大吸收峰,選擇該波長可以獲得最佳的測量靈敏度和準確性。例如,對於(yu) DNA的測量,通常選擇260nm和280nm的波長。
確定光程長度:光程長度是指光線通過樣品的距離,一般為(wei) 1cm。但部分超微量分光光度計的光程較短,如0.5mm、1mm等,具體(ti) 需根據儀(yi) 器型號和樣品特性來確定。
設定測量模式:常見的測量模式有吸光度模式、濃度模式、透過率模式等。吸光度模式用於(yu) 直接測量樣品的吸光度值;濃度模式可以根據標準曲線自動計算樣品的濃度;透過率模式則用於(yu) 測量樣品的透光率。用戶需根據實驗目的和樣品情況選擇合適的測量模式。
3、樣品測量
空白對照調零:在進行樣品測量之前,通常需要進行空白對照調零,以消除溶劑、比色皿等因素對測量結果的影響。取適量的空白溶劑(如蒸餾水、緩衝(chong) 液等),加到檢測基座上,放下樣品臂,浸泡一段時間(如2-3分鍾),然後用無塵紙將檢測基座擦拭幹淨。之後點擊調零按鈕,使儀(yi) 器以空白溶劑為(wei) 空白對照進行調零。
加入樣品:將待測樣品用移液器吸取適量,加到檢測基座上。注意加樣時要緩慢、準確,避免產(chan) 生氣泡或溢出。對於(yu) 一些需要稀釋的樣品,應先進行適當的稀釋處理,使其濃度在儀(yi) 器的線性範圍內(nei) 。
開始測量:放下樣品臂,使樣品與(yu) 檢測基座充分接觸。然後點擊測量按鈕,儀(yi) 器將自動記錄並顯示樣品的吸光度值、濃度或其他相關(guan) 參數。測量完成後,屏幕會(hui) 顯示測量結果,包括吸光度、濃度、A260/A280比值等信息。
4、數據處理與(yu) 記錄
查看結果:測量完成後,仔細查看儀(yi) 器顯示的測量結果,確認數據的準確性和可靠性。如果需要進行多次測量,可以記錄每次的測量結果,並計算平均值和標準差。
保存數據:將測量結果保存到計算機或打印機中,以便後續分析和處理。可以使用儀(yi) 器自帶的軟件或第三方軟件進行數據處理和分析。