如何操作熒光定量PCR儀？

　　熒光定量PCR儀(yi) 的操作流程主要包括實驗前準備、反應體(ti) 係設計、PCR反應條件設置、儀(yi) 器開機與(yu) 樣品放置、軟件操作與(yu) 程序編輯等步驟。以下是對這些步驟的具體(ti) 介紹：

　　

　　一、實驗前準備

　　

　　1、試劑準備：確保所有試劑和設備的質量良好，避免對實驗結果產(chan) 生影響。準備好所需的試劑和設備，包括PCR試劑盒、引物、模板DNA或RNA樣品、PCR儀(yi) 等。

　　

　　2、實驗室環境：在超淨工作台上進行所有步驟，使用75％乙醇或其他去汙劑擦拭工作台，避免表麵汙染。進入實驗室後需要佩戴一次性無菌口罩、無菌乳膠手套，盡量避免與(yu) 同事交談，防止PCR模板汙染。

　　

　　二、反應體(ti) 係設計

　　

　　設計反應體(ti) 係：根據實驗需要設計好PCR反應體(ti) 係，包括引物濃度、模板DNA或RNA濃度、試劑盒成分等。合理的反應體(ti) 係設計是保證實驗成功的關(guan) 鍵。

　　

　　三、PCR反應條件設置

　　

　　設定反應條件：根據所用的PCR試劑盒和目標分子的特性，設置好PCR反應的溫度、時間和循環次數等條件。合理的PCR反應條件能夠提高PCR反應的特異性和效率，減少非特異性產(chan) 物的形成。

　　

　　四、儀(yi) 器開機與(yu) 樣品放置

　　

　　1、開啟儀(yi) 器：開啟熒光定量PCR儀(yi) 及其相連的電腦。點擊PCR儀(yi) 上的“Eject”按鈕，放入已離心過的八連管樣品，再緩慢關(guan) 閉接樣台。

　　

　　2、放置樣品：將PCR反應體(ti) 係加入到0.2ml低緣八聯管，蓋上管蓋；或加入低緣96孔板，用光學級封膜封好。注意，必須帶一次性塑料手套，不要讓手指接觸到反應管表麵。將反應管按順序放入儀(yi) 器的加熱孔中。

　　

　　五、軟件操作與(yu) 程序編輯

　　

　　1、打開軟件：在電腦上打開與(yu) PCR儀(yi) 配套的軟件，找到對應的實驗程序文件夾。根據實驗需求，選擇或編輯相應的程序。編輯過程中，確保所放樣品的地址以及信息準確無誤。

　　

　　2、保存程序：編輯完成後，點擊“File”選擇“Saveas”，將程序保存到相對應的文件夾中，並務必修改程序名稱（包含日期、時間等信息）。隨後，通過軟件將編輯好的程序傳(chuan) 出到PCR儀(yi) 上。

　　

　　總的來說，熒光定量PCR儀(yi) 的操作雖然涉及多個(ge) 步驟，但隻要按照規範的流程進行，就可以有效地完成實驗並獲得可靠的結果。