定量PCR儀的來曆及工作原理

聚合酶鏈式反應，簡稱PCR。其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是體(ti) 外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個(ge) 周期,循環進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。它不僅(jin) 可用於(yu) 基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用於(yu) 疾病病的診斷或任何有DNA,RNA的地方．聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，簡稱PCR）又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體(ti) 外引物定向酶促擴增技術。 由美國科學家PE（Perkin Elmer珀金-埃爾默）公司遺傳(chuan) 部的Dr. Mullis發明，由於(yu) PCRPCR技術在理論和應用上的跨時代意義(yi) ，因此Mullis獲得了1993年諾貝爾化學獎。

定量PCR儀工作原理

類似於(yu) DNA的天然複製過程，其特異性依賴於(yu) 與(yu) 靶序列兩(liang) 端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(ge) 基本反應步驟構成：
①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時 聚合酶鏈式反應間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為(wei) 單鏈，以便它與(yu) 引物結合，為(wei) 下輪反應作準備；
②模板DNA與(yu) 引物的退火(複性)：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與(yu) 模板DNA單鏈的互補序列配對結合；
③引物的延伸：DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為(wei) 反應原料，靶序列為(wei) 模板，按堿基配對與(yu) 半保留複製原理，合成一條新的與(yu) 模板DNA鏈互補的半保留複製鏈重複循環變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留複製鏈”，而且這種新鏈又可成為(wei) 下次循環的模板。每完成一個(ge) 循環需2～4分鍾，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬(wan) 倍。