糾結，該如何選購熒光定量PCR

    熒光定量PCR（qPCR）是以熒光為(wei) 基礎的定量分析技術，應用非常廣泛，可以用於(yu) 定量RNA的豐(feng) 度（RT-qPCR），驗證芯片或測序的數據，確定病原體(ti) 的載量，進行基因分型等等。

    熒光定量PCR儀(yi) 負責監控反應體(ti) 係中熒光強度的變化，記錄檢測熒光達到閾值時的循環數（被稱為(wei) Ct或Cq值）。從(cong) 理論上說，每一個(ge) qPCR循環會(hui) 使目標序列翻倍，因此人們(men) 可以在Ct值的基礎上對樣本進行定量。

    在進行熒光定量PCR時，我們(men) 往往會(hui) 麵臨(lin) 眾(zhong) 多選擇，每一步選擇都影響著實驗的zui終結果。好在市麵上的qPCR產(chan) 品也種類繁多，可以滿足我們(men) 的各種需求。

    染料法VS探針法熒光定量PCR主要分為(wei) 染料法和探針法兩(liang) 種。染料法一般采用DNA染料SYBR?Green（或Promega的BRYT?Green等），這種方法不僅(jin) 使用簡單，成本也zui低。不過染料法檢測的是體(ti) 係中的所有雙鏈DNA，不具有序列特異性。為(wei) 此，一些廠商提供ROX作為(wei) 內(nei) 部熒光參考標準，用來校正背景。

    成本低是染料法qPCR的一個(ge) 主要優(you) 勢，DNA染料相對比較便宜，而且適用於(yu) 任何序列。不過染料法無法在同一個(ge) 樣本中檢測多個(ge) 指標，也難以鑒定擴增得到的序列，會(hui) 受到脫靶效應（如引物二聚體(ti) ）的影響。在這種情況下，就需要進行熔解曲線分析，判斷擴增所得產(chan) 物是否隻有一種。