光是電磁波,波長100nm——400nm稱為(wei) 紫外光,400nm——780nm之間的光可被人眼觀察到,大子780nm稱為(wei) 紅外光。人們(men) 隻所以能夠看到色彩,是因為(wei) 光照射到物體(ti) 上被物體(ti) 反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因為(wei) 植物吸收了光中的紅色光譜。Tecan多功能酶標儀(yi) 測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。
檢測單位:
光通過被檢測物,前後的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與(yu) 被吸收的能量成定量關(guan) 係。
檢測單位用OD值表示,OD是optical delnsity(光密度)的縮寫(xie) ,表示被檢測物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans為(wei) 檢測物的透光值。根據Bouger-amberT-beer法則,OD值與(yu) 光強度成下述關(guan) 係:
E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度,Ι0為(wei) 在檢測物之前的光強度,Ι為(wei) 從(cong) 被檢測物出來的光強度。
OD值由下述公式計算:
E=OD=C×D×E
C為(wei) 檢測物的濃度
D為(wei) 檢測物的厚度
E為(wei) 摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質都有其特定的波長,在此波長下,此物質能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會(hui) 造成檢測結果的不準確。因此,在測定檢測物時,我們(men) 選擇特定的波長進行檢測,稱為(wei) 測量波長。
但是每一種物質對光能量還存在一定的非特異性吸收,為(wei) 了消除這種非特異性吸收,我們(men) 再選取一個(ge) 參照波長,以消除這個(ge) 不準確性。在參照波長下,檢測物光的吸收zui小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
Tecan多功能酶標儀(yi) 檢測值計算
儀(yi) 器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量,轉換成二進位數字信號,zui大為(wei) 4095。儀(yi) 器定義(yi) 沒有光源下的透光值為(wei) 0%,沒有檢測物的透光值為(wei) 100%。則實際檢測中,檢測物的透光值均在0%——100%之間。透光值的計算如下:
T=(Meas-Min)/(Max-Min)
其中T為(wei) 透光值,Meas為(wei) 檢測的二進位數值,Min為(wei) 在0%的情況下檢測的二進位數值,Max為(wei) 在100%的情況下檢測的二進位數值,舉(ju) 例如下:
Max=3600 Mn=20 Meas=30
T=(30-20)/3600-20)=0.0028
OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552